l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

來(lái)源于一位36碎白人女性，MCF 10A 來(lái)源于群體中的貼壁細(xì)胞。MCF 10A 細(xì)胞系是一種非致瘤性上皮細(xì)胞系。細(xì)胞上皮唾液黏蛋白、細(xì)胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈陽(yáng)性。它們?cè)谀z原蛋白中表現(xiàn)出三維生長(zhǎng)，并在融合培養(yǎng)物中形成圓頂。到目前為止，細(xì)胞沒(méi)有顯示出終末分化或衰老的跡象。該線(xiàn)對(duì)胰島素、糖皮質(zhì)激素、霍亂腸毒素和表皮生長(zhǎng)因子 (EGF) 有反應(yīng)。通過(guò)電子顯微鏡，細(xì)胞顯示管腔導(dǎo)管細(xì)胞的特征，但不顯示肌上皮細(xì)胞的特征。它們還表達(dá)通過(guò)與 MFA-Breast 和 MC-5 單克隆抗體的陽(yáng)性反應(yīng)檢測(cè)到的乳腺特異性抗原。培養(yǎng)基中的鈣含量對(duì)細(xì)胞的形態(tài)有很強(qiáng)的影響。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備MEGM kit培養(yǎng)基 （Lonza/Clonetics,CC-3150）備注：培養(yǎng)基包含（A+B）

A :  MEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)液 （貨號(hào)CC-3151）         

B:  細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑 5管 （貨號(hào)CC-4136）         5管

1)  CC-4009G      BPE            2.0ml

2)  CC-4017G      hEGF           0.5ml

3)  CC-4021G      INSULIN        0.5ml

4)  CC-4031G    HYDROCORTISONE  0.5ml

5)  CC-4081G      GA-1000         0.5ml

C: 霍亂毒素（cholera toxin）（awcell-8070） (100ng/ml) 500 ul

D:  P/S青霉素-鏈霉素 （awcell-15140-122）         5 ml

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%； 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。