人胚腎細胞293T是293細胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產生的高轉染效率的衍生細胞株。

　　人胚腎細胞293T的培養步驟：

　　1）培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液；

　　2）無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養體積加入）；

　　3）加入適量胰酶消化適當時間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養，消化1－2分鐘足矣）；

　　4）用槍頭吹打數十次（視細胞類型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時一般2分鐘左右）；

　　5）加入適量體積*培養基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，可以加入1mL*培養基；現在培養瓶（皿）里有2mL溶液）。

　　6）現在可以將溶液進行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個培養瓶（皿）里。如果是原代培養，可以根據消化時間來對細胞進行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉入新的培養瓶（皿）。

　　7）將兩個培養瓶（皿）補足*培養基到正常體積（果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶，為5mL*培養液）

　　8）鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內會貼壁，如果已經貼壁，根據細胞類型有不同的形態，但通常都不是圓形。

　　9）鏡下觀察無誤之后，再放入細胞培養箱。培養瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

　　10）傳代之后，第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。