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介紹小鼠海馬神經元細胞HT22培養的注意事項

更新時間:2025-02-19  |  點擊率:1978
  海馬椎體神經元是海馬區的主要成分,主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。小鼠海馬神經元細胞HT22培養是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型,其在神經生物學,發育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
  一、傳代培養
  傳代前準備--胰蛋白酶消化--吹打分散細胞--分裝稀釋細胞--繼續培養
  1)將培養瓶內舊的培養液棄掉,然后用D-Hanks液洗兩次,(一定要洗干凈,以免影響胰酶的消化作用)。
  2)加入0.25%胰酶-EDTA消化,25cm培養瓶加0.4ml,37度消化5min,鏡下看到細胞變圓,間隙增大。
  3)立即加含10%FCS的培養液終止消化,用細胞刮刀輕刮,注意,這時候用吸管吹不下來,但是刮刀卻很容易刮下來,而且對細胞的損傷極小。
  4)離心,棄上清,加新的培養液(10%FCS),小心吹勻,分裝入新的培養瓶。
  二、注意事項
  1、不要輕易改變培養液,我曾經把MEM換成1640后,細胞傳幾代后莫名其妙死亡。
  2、如果想節省消化液,上面第2步可換成3-5mlDPBS洗,主要是去除培養瓶里會影響消化液作用的成分。
  3、自配消化液一定要調PH(=7.8-8)值,并且注意分裝,-20度保存,避免反復凍融,用前37度預熱,消化較好較快。
  4、嚴格的無菌操作。
  5、適度消化:消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應該注意培養細胞形態的變化,一旦胞質回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。
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