人膀胱癌細胞的培養通常遵循以下步驟和條件：
 

　　一、培養條件
 

　　培養基：常用RPMI-1640或DMEM等培養基，并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的雙抗(青霉素/鏈霉素)以提供必要的營養和防止污染。
 

　　培養環境：細胞需在37℃、5% CO2及飽和濕度的培養箱中培養。
 

　　二、培養步驟
 

　　復蘇：
 

　　將凍存的細胞從液氮中取出，迅速置于37℃水浴中搖晃解凍。
 

　　解凍后，將細胞懸液轉移至含有適量培養基的離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用新鮮培養基重懸細胞，接種至培養瓶中，置于培養箱中培養過夜。
 

　　第二天換液并檢查細胞密度。
 

　　傳代：
 

　　當細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代。
 

　　棄去舊培養基，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1~2次。
 

　　加入適量的胰蛋白酶消化液(如0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)，置于37℃培養箱中消化1~2分鐘。
 

　　在顯微鏡下觀察細胞消化情況，待細胞大部分變圓并脫落后，加入培養基終止消化。
 

　　輕輕吹打細胞，使其脫落，并轉移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用新鮮培養基重懸細胞，按1:2到1:5的比例分到新的培養瓶或培養皿中，補足培養基，置于培養箱中繼續培養。
 

　　凍存：
 

　　待細胞生長狀態良好時，可進行凍存。
 

　　棄去舊培養基，用PBS潤洗細胞后，加入胰蛋白酶消化液消化細胞。
 

　　消化完成后，加入培養基終止消化，并輕輕吹打細胞使其脫落。
 

　　將細胞懸液轉移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
 

　　用凍存液(如90%FBS+10%DMSO)重懸細胞，并調整細胞密度至適宜范圍。
 

　　將細胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml左右，并標注好細胞名稱、代數、日期等信息。
 

　　將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80℃冰箱過夜，然后轉入液氮中長期保存。
 

　　三、注意事項
 

　　無菌操作：整個培養過程中需嚴格遵循無菌操作原則，防止細胞污染。
 

　　消化時間：消化時間需根據細胞類型和胰蛋白酶活性進行調整，避免消化過度導致細胞損傷。
 

　　換液周期：一般每2~3天換一次液，以保持培養基的新鮮和營養充足。
 

　　細胞狀態觀察：定期觀察細胞生長狀態，包括細胞形態、密度、生長速度等，以便及時調整培養條件。